Hiếu An hoàng hậu mang họ Trần (陈氏), sinh ngày 29 tháng 1 (âm lịch) năm Gia Tĩnh thứ 15 (1536) thời Minh Thế Tông, nguyên quán ở Thông Châu. Cha là Cố An bá Trần Cảnh Hành (固安伯陳景行), đương thời ông đang giữ chức Cẩm y vệ Phó thiên hộ (锦衣卫副千户).

Năm Gia Tĩnh thứ 37 (1558), dưới triều Minh Thế Tông Gia Tĩnh hoàng đế, Dụ vương phi Lý thị qua đời. Trần thị được ban hôn trở thành Dụ vương Kế phi (裕王继妃). Hiếu Định thái hậu Lý thị khi ấy đang là cung nữ theo hầu Trần Vương phi.